incorporación de la técnica de RT-PCR para la detección del virus sincitial respiratorio / Incorporation of the RT-PCR technique to the detection of respiratory syncitial virus

Objetivo: Estandarizar e incorporar técnicas de biología molecular, RT-PCR para la detección del virus sincitial respiratorio que complementen y enriquezcan el diagnóstico.Material y métodos: se utilizaron cepas de referencia del virus sincitial respiratorio de los grupos A y B (virus stock ATCC), las cuales se propagaron y titularon en células HEp-2. Se realizaron pruebas de inmunofluorescencia indirecta y de la prueba RT-PCR. Para ello se extrajo el ARN del virus con trizol, se realizó una transcripción reversa para obtener ADNc y, para la PCR se utilizaron oligonucleótidos que amplifican un fragmento del gen de la proteína G del virus sincitial respiratorio. Para comprobar la especificidad de la prueba se utilizaron virus de la misma familia (sarampión y parainfluenza) y virus de diferentes familias (influenza y adenovirus). Al evaluar la sensibilidad se utilizaron diferentes diluciones del ADNc viral.Resultados: en el cultivo, el efecto citopático se puede observar claramente del cuarto al octavo día. La prueba de inmunofluorescencia como se sabe es una técnica sensible y específica para el virus. La RT-PCR que se desarrollo, fue efectiva para la amplificación del ADNc; además, mostró ser específica para el virus sincitial respiratorio, ya que no amplifica material genético de otros virus incluyendo a aquellos que pertenecen a la misma familia. La sensibilidad de la prueba es alta, alcanzando a amplificar hasta picogramos de ADNc.Conclusiones: la rapidez de la inmunofluorescencia, permite dar un diagnóstico presuntivo que después puede ser comprobado por el aislamiento y propagación del virus en cultivo celular. La técnica de RT-PCR con los oligonucleótidos que utilizamos fue sensible, específica y rápida, por tanto debe ser tomada en cuenta para el apoyo al diagnóstico clínico. Con lo anterior, no se trata de sustituir las técnicas tradicionales, sino contar con mayores opciones y además reforzarlas; de esta manera, se podrá fundamentar mejor el diagnóstico de las infecciones virales.

Virus influenza: enigma del pasado y del presente / Influenza virus: past and present riddle

Antecedentes. El virus de la influenza es biológica y bioquímicamente único. En el pasado causó pandemias con mortalidad elevada, y en la actualidad continúan originando epidemias con alto impacto en la salud y en la economía. Son tres los tipos inmunológicos del virus A, B y C que infectan al humano; además, los del tipo A también pueden infectar a un amplio rango de animales, en particular diversas especies de aves, cerdos y caballos. Características. Los virus presentan un genoma de ARN de polaridad negativo, segmentado, esta característica facilita el elevado grado de variabilidad, particularmente en los virus de tipo A, cuya variación es originada principalmente por mutación o por recombinación genética, este fenómeno se incrementa si el virus pasa de una especie animal a otra, lo que genera nuevos subtipos virales, los cambios más importantes se dan en las glucoproteínas, hemaglutinación y neuraminidasa. Inmunidad. Se ha descrito que la resistencia depende de la inmunidad hacia las proteínas de superficie, especialmente la hemaglutinina por tal motivo, cuando aparece un nuevo subtipo viral la población humana es sensible a la infección. Actualmente se cuenta con algunas vacunas, sin embargo, el éxito que se tiene con ellas es limitado en humanos. Las campañas de información sobre control y detección de casos por ahora son de gran importancia. Así, a pesar de los avances que se han logrado en la ciencia, el virus de la influenza continúa siendo un enigma

Infección en pacientes con inflamación y enfermedad pulmonar obstructiva crónica o asma / Infection in patients with chronic obstructive pulmonary disease and inflammation of asthma

Objetivo: Determinar la frecuencia de infección viral y bacteriana en inflamación aguda de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica o asma. Material y Métodos: Se incluyeron 140 pacientes; 46 con enfermedad pulmonar obstructiva crónica y 94 con asma, todos con inflamación aguda del aparato respiratorio y edades entre 20 a 70 años y como grupo de control 80 pacientes con inflamación aguda por infección respiratoria aguda sin antecedentes de enfermedad pulmonar crónica o asma. Se tomo muestra de exudado nasofaringeo para el aislamiento viral y bacteriano y se dio seguimiento para ver la evolución. Resultados: El 49 por ciento de los pacientes del grupo de trabajo presentaron infección viral y 13 por ciento infección bacteriana, el virus más frecuente fue parainfluenza, los casos más severos se observaron en este grupo. En el grupo control, 55 por ciento presentó infección viral, el más frecuente fue parainfluenza. Conclusiones: Los virus son agentes importantes que pueden incrementar la inflamación aguda en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica o asma, generalmente son los mismos que infectan a personas sin daño previo, pero las infecciones pueden ser más severas cuando hay un daño del aparato respiratorio

Efectos biológicos en células HEp-2, en la multiplicación del adenovirus tipo 6 y en la concentración de interferón en plasma humano en presencia de un RNA de transferencia fúngico / Biological effects in HEp-2 cells, adenovirus type 6 and interferon concentration in human plasma in the presence of a fungal transfer RNA

Introducción: Trabajos previos mostraron la capacidad antiviral in vitro, así como la utilidad como inductor de interferón natural (IFN-n) in vivo de un RNA de transferencia (tRNA) de origen fúngico, por este motivo se sigue estudiando esta molécula como una alternativa para el tratamiento antiviral. Objetivos: Estudiar el efecto del tRNA fúngico en la viabilidad, síntesis de DNA y en la multiplicación del adenovirus tipo 6 (AV-6) en células HEp-2, comparado su efecto con el producido por el polyl:polyC o por IFN-Ó. Valorar su capacidad como unductor a largo plazo de la síntesis de IFN-n in vivo. Material y métodos: Células HEp-2 se incubaron con diferentes concentraciones de las moléculas mencionadas durante 24 horas, y se determinó la viabilidad y la síntesis de DNA celular; adicionalmente cultivos tratados en las mismas condiciones se infectaron con 200 unidades formadoras de placas (ufp) del AV-6, se incubaron cinco días adicionales, y se valoró el grado de protección. In vivo a siete voluntarios clínicamente sanos se les administró intramuscularmente una dosis única de 100 mg del tRNA, y se determinó mediante la técnica de inhibición del efecto citopático (ECP) el nivel sérico de IFN-n, cinco días después de la inoculación. Resultados. El tRNA protegió a las células HEp-2 contra la infección por AV-6, mejor que el polyl:polyC y de forma similar al IFN-Ó. Ninguna de las tres sustancias afectó significativamente la viabilidad celular. En cambio, la síntesis de DNA sí disminuyó de manera directa en relación con la concentración de los inductores, no así con el IFN-Ó. En los plasmas de los sujetos tratados con el tRNA fúngico se encontró un aumento en la concentración de IFN-n (de 84.2 ñ 107.6 a 171.42 ñ 129.5 UI/mL) a los cinco días, aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa. Conclusión. El tRNA fúngico mostró actividad antiviral contra el AV-6, no afectó la viabilidad pero sí la síntesis celular de DNA, y con una capacidad de mantener elevada hasta por cinco días la concentración plasmática de IFN-n en humanos

Fijación y tinción de las placas de los virus herpes simple tipo 1 y sincitial respiratorio / Fixing and staining of tipe 1 herpes simplex and respiratory syncytial viruses plaques

El presente trabajo, se realizó en el laboratorio de Virología del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, México, D.F. Los objetivos fueron: encontrar las condiciones óptimas para la fijación y tinción de las placas virales producidas por los virus herpes simple tipo 1 y sincitial respiratorio: Ambos virus, fueron propagados en monocapas de células Vero y se observaron a diferentes tiempos. Para la fijación de las monocapas infectadas se probaron cinco sustancias: formaldehído, etanol, metanol, acetona y éter-metanol y se tiñeron con tres colorantes: Giemsa, Wrigth y cristal violeta. Los mejores resultados se obtuvieron al usar éter al 5 por ciento en metanol como fijador y Giemsa como colorante. El tiempo más corto en que se observó el efecto citopático fue: 18 h para el virus sincitial respiratorio y 15 h para el virus herpes simple. por lo que el uso de estas sustancias, facilitó la visualización del efecto citopático en tiempos breves